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HER2系列推文的前两篇详细介绍了HER2基因突变、扩增和蛋白过表达的检测（熙宁小课-第127期 | 精准治疗的钥匙（一） ：HER2变异检测在药物研发中的应用、熙宁小课-第133期 | 精准治疗的钥匙（二）：揭秘HER2基因扩增/蛋白过表达），HER2基因扩增和蛋白过表达的检测结果判读相对复杂，不同癌种也存在一定差异。本文将详细介绍几类常见癌种的HER2基因扩增和蛋白过表达检测结果的判读方法。
PART 01
乳腺癌HER2判读
所有乳腺原发性浸润性癌都应进行HER2检测。只要能获取肿瘤组织，也应该对复发灶和转移灶进行HER2检测。采用免疫组织化学法检测HER2蛋白的表达水平，采用原位杂交法检测HER2 基因扩增水平。
检测流程：乳腺癌标本一般可先做IHC检测，IHC 3+判断为HER2阳性，IHC 0和1+则判断为HER2阴性，IHC 2+则需进一步应用原位杂交的方法进行HER2基因扩增状态检测，也可以选取不同的组织块重新检测或送其他实验室进行检测。
图1 HER2免疫组织化学检测判断标准[3]
图2 HER2双探针原位杂交检测判断标准[3]
HER2/CEP17比值<2.0，平均HER2 拷贝数/细胞≥4.0且<6.0时，建议重新计数至少20个细胞核中的信号，如果结果改变，则对两次结果进行综合判断分析。如仍为上述情况，需要在FISH报告中备注：此类患者HER2状态的判断需结合IHC结果，若IHC结果为3+，HER2状态判为阳性。若IHC结果为0、1+或2+，HER2状态应判为阴性。
注意事项
· 仅判读浸润性癌的膜染色，原位癌和细胞质着色不纳入评估。
· 正常上皮阴性。
· 乳腺癌骨转移标本，脱钙会影响IHC评估，脱钙标本应使用ISH检测。
· 远处转移的乳腺癌，原发灶和转移灶都需要进行HER2评估。
· 当<10%的肿瘤细胞出现强而完整的阳性或中等-强阳性但膜染色不完整应该计2+，可以选用其他组织重做IHC或进行ISH检测。
· 在乳腺浸润性微乳头状癌和部分有分泌现象的乳腺癌中，呈现特殊的基底及侧膜U型染色模型时：如果膜表达为很深的棕褐色U型，可等同完整的细胞膜染色；若呈现弱⁃中等强度的细胞膜染色，应判为HER2+，并需要行原位杂交检测进一步明确HER2状态。
HER2低表达乳腺癌
约45%～55%乳腺癌呈现HER2低表达状态，IHC1+，或IHC 2+且原位杂交HER2基因无扩增。HER2低表达乳腺癌的治疗成为乳腺癌诊疗的热点问题。随着抗体偶联药物在HER2低表达乳腺癌患者疗效的确立，HER2低表达已成为乳腺癌新的靶向治疗亚型[4]。
图3 乳腺癌HER2低表达判读流程[4]
PART 02
胃癌HER2判读
所有经病理诊断证实为胃癌的病例均有必要进行HER2检测；胃癌活检标本和手术标本均适用于HER2检测，对于新辅助治疗后的病灶以及复发或转移病灶，如能获得足够标本，建议重新进行HER2检测。
检测流程：HER2状态检测首先选用IHC法；IHC 3+的病例判断为HER2阳性，无需进一步做原位杂交检测；IHC 1+和IHC 0的病例，判断为HER2阴性，无需进一步做原位杂交检测；IHC 2+的病例为不确定病例，需进一步行原位杂交检测，如原位杂交阳性，判断为HER2阳性；如原位杂交阴性，判断为HER2阴性[5,6]。
表1 胃癌HER2免疫组织化学染色判读和评分标准[5]
表2 胃癌HER2双探针原位杂交检测判读标准[5]
注意事项
· 手术样本：胃癌中HER2的高表达与组织学类型和分化程度相关（肠型表达高于弥漫型，低级别与HER2高表达的相关性更高），因此选择低级别和肠型腺癌的组织做IHC更合适；
· 活检样本： 1. 由于肿瘤的异质性，应尽量对所有活检肿瘤组织进行IHC；2. 活检标本的结果是基于表达最强阳性组织，而不是对多个活检组织的结果进行平均。
· 手术标本和活检标本主要区别在于活检仅需要5个肿瘤细胞簇。
· 与胃癌相比，胃食管交界腺癌HER2过表达率略高。
· 应针对IHC表达最强的区域进行ISH检测。
· 组织固定不佳、非特异性染色（肿瘤细胞质、细胞核染色）、正常粘膜染色（肠化）的样本应该不做判读或用ISH重新检测。
· 完整基底膜或侧向膜染色代表阳性，这与乳腺癌不同，乳腺癌强调完整细胞膜。
· HER2扩增的肿瘤细胞腔缘通常不着色，因此没有侧向和基底膜着色，只有管腔表面着色的肿瘤细胞判读为阴性 。
· 如果手术标本IHC<10%强阳性，应进行ISH检测，以排除假阴性。
· 对于着色强度相当于IHC 3+水平、但阳性细胞比例不足10％的手术标本，建议更换一个肠型成分较多的蜡块再次进行检测。
· 如果再次检测后仍达不到IHC 3+评分标准，则仍按指南推荐的评分标准进行相应评分，但需在报告中备注说明该病例的特殊性（如：不足10％的肿瘤细胞呈HER2阳性且强度相当于IHC 3+），并建议在胃癌多学科诊疗小组进行讨论，必要时进行FISH检测 。
PART 03
尿路上皮癌HER2判读
所有局部晚期或转移性尿路上皮癌患者都应进行HER2蛋白表达检测，同时推荐所有术后经病理学诊断为肌层浸润性尿路上皮癌(≥pT2期)的患者常规行HER2蛋白表达检测[7]。
表3 尿路上皮癌HER2免疫组织化学染色判读和评分标准[7]
表4 尿路上皮癌HER2基因扩增检测判读标准[7]
注意事项
· 由于HER2在尿路上皮癌中肿瘤异质性高，在判读和评分时需先在低倍镜下观察整张切片，综合判断。
· 尿路上皮癌HER2 IHC着色部位为胞膜，可以存在胞浆胞膜均染色的情况，胞浆着色不应掩盖胞膜着色。
PART 04
结直肠癌HER2判读
所有转移性结直肠癌应进行HER2免疫组织化学检测，HER2过表达在所有结直肠癌中占2%~3%，常见于左半结肠癌、RAS野生型患者。目前，HER2过表达状态被认为可能是抗EGFR单抗疗效的负性预测因子[8]。如果已知 RAS/RAF基因突变，则无需进行HER2检测[9,10]。
图5 结肠癌NCCN指南HER2检测[9]
图6 直肠癌NCCN指南HER2检测[10]
判读标准：免疫组织化学检测HER2阳性定义为：＞ 50%的肿瘤细胞呈现3+阳性（即细胞膜的基底、侧边或整个胞膜呈强阳性着色）。HER2评分为2+的患者应通过 FISH检测进一步明确 HER2 状态，HER2基因扩增阳性定义为：＞50%的肿瘤细胞 HER2/CEP17比值≥ 2.0[9-11]。
PART 05
结语
熙宁生物|精翰生物的IHC和FISH平台已经成功完成了HER2蛋白过表达及基因扩增的检测方法开发，并顺利在多个癌种中完成了验证。这些检测方法还多次获得了多家权威室间质评机构的高度认可，便捷、可靠，可供申办方直接使用。
此外，熙宁生物|精翰生物的病理平台汇聚了一支技术精湛的病理医生团队。这个团队在多个癌种HER2检测结果判读方面拥有丰富的经验，能够有效地支持申办方在HER2检测及结果判读方面的需求。熙宁生物|精翰生物的病理医生团队还可提供包括药物临床试验中的病理阅片、pCR病理学评估、数字化玻片扫描以及数字化病理分析等多项服务，全面满足临床试验中各种病理阅片的需求。
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熙宁|精翰 HER2 检测室间质评证书展示
参考文献
[1] Nat Rev Cancer. 2021 Mar;21(3):181-197.
[2] Nature Reviews Clinical Oncology 17, 33–48 (2020).
[3] 乳腺癌HER2检测指南（2019版），中华病理学杂志2019 年3月第48 卷第3期Chin J Pathol，March 2019, Vol. 48, No. 3.
[4] 人表皮生长因子受体2低表达乳腺癌临床诊疗共识(2022版)，中华肿瘤杂志, 2022, 44(12) : 1288-1295.
[5] 胃癌HER2检测指南 (2011版) ，中华病理学杂志2011年8月第40卷第8期Chin J Pathol, August 2011, Vol. 40, No.8.
[6] 胃癌Her2检测指南(2016版) ，中华病理学杂志2016年8月第45卷第8期Chin J Pathol, March 2016, Vol. 45, No.8.
[7] 中国尿路上皮癌人表皮生长因子受体2检测临床病理专家共识，中华肿瘤杂志, 2021,43(10) : 1001-1006.
[8] 结直肠癌靶向治疗中国专家共识，中华结直肠疾病电子杂志, 2022年10月 第11卷 第5期 Chin J Colorec Dis (Electronic Edition), October 2022, Vol, 11, No.5.
[9] NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology Colon Cancer Version 4.2023 — November 16, 2023.
[10] NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology Rectal Cancer Version 6.2023 — November 16, 2023.
[11] Lancet Oncol. 2016 Jun;17(6):738-746.
