图1 GLP-1作用示意图

  PK

由于GLP-1的作用靶点是细胞膜上的GLP-1R，GLP-1R属于G蛋白偶联受体家族，它的典型特征是具有一个七次跨膜的结构域，这使得重组表达的GLP-1R很难保持和GLP-1的高亲和力，难以作为靶蛋白应用到GLP-1的检测实验中。GLP-1结构类似药物的PK通常选择双抗夹心的原理进行设计。

GLP-1融合蛋白作为激动剂药物，临床用药剂量相对较低，灵敏度要求通常在几ng/mL，可使用定制的抗体对或商品化抗体实现PK浓度的检测。

  ADA 

可采用桥联法来设计ADA检测模式，为了改善药物耐受，采用酸化解离样品后经固相包被药物的载体捕获ADA，然后将ADA酸洗脱下来的方式进行样品纯化后检测。纯化后的样品也可采取物理吸附的方式结合到分析板上，然后用标记的药物作为检测试剂进行检测。

图2 ADA检测原理示意图

GLP-1融合蛋白药物属于内源性GLP-1的类似物，在ADA检测中除了常规的筛选→确证→滴度三层级检测外，还需对在确证实验中检测为阳性的样品进行内源性GLP-1交叉反应实验，以了解抗药抗体是否有影响内源性GLP-1的风险。

  NAb 

基于药物的作用机理，GLP-1类药物的中和抗体分析应采用细胞法。

功能细胞株高表达GLP-1R，GLP-1的结合使细胞活化，胞内cAMP 浓度上升，通过下游信号通路，激活荧光素酶报告基因的转录，在加入底物后产生化学信号。当中和抗体存在时会阻碍药物和细胞上的GLP-1R结合，抑制细胞的活化，表现为信号降低。

图3 中和抗体检测原理示意图

 GLP-1R报告基因细胞株数据：

Dulaglutide的剂量权限，结果显示GLP-1R报告基因稳转细胞株复孔间信号CV非常小，有明显的上下剂量曲线平台期，信号窗口S/N为118。

Dulaglutide中和抗体有明显的抑制Dulaglutide刺激GLP-1R报告基因稳转细胞株的作用，中和抑制曲线明显，中和抗体的灵敏度约为150ng/mL，方法学灵敏。

 GIPR报告基因细胞株数据：

标准品为Gastric Inhibitory Peptide (GIP)。结果显示，含20%混合人血清的反应体系，其基质效应明显高于含5%和10%混合人血清的反应体系。而含5%和10%混合血清的反应体系结果相差不大。

标准品为Gastric Inhibitory Peptide (GIP)，对照品为Liraglutide, Human Glucagon(1-29)和Dulaglutide。结果显示，Liraglutide, Glucagon(1-29), Human和Dulaglutide没有非特异信号产生，特异性良好。

 GCGR报告基因细胞株数据：

标准品为Glucagon(1-29),Human。结果显示GLP-1R报告基因稳转细胞株复孔间信号CV非常小，有明显的剂量依赖信号响应，信号窗口S/N大于100倍。

Glucagon作为刺激剂， Hu1803-9D标准曲线梯度稀释加入体系中。结果显示，Hu1803-9D对Glucagon的抑制作用随Hu1803-9D浓度升高而增大，且在含有5%混合人血清的环境中与培养基组没有明显差异。